［摘要］ 目的：：：探索烧伤湿性医疗手艺于浅Ⅲ度烧伤时脂肪层烧伤创面自然修复的机制。！！！Ｒ：：：应用细胞免疫化学要领生物素－抗生物素卵白(biotin-avidin)DCS系统间接免疫荧光手艺。！！！Ｒ孕∈罂谷私锹寻19的单克隆抗体检测表皮再生干细胞。！！！ＰЧ：：：烧伤后24h可见表皮再生干细胞泛起。！！！Ｉ丈撕4天表皮再生干细胞数目增多。！！！

烧伤后7天和14天表皮再生干细胞数目最多。！！！Ｉ丈撕21天和28天表皮再生干细胞镌汰。！！！＝崧：：：烧伤湿性医疗手艺对浅Ⅲ度烧伤剩余组织中的再生表皮干细胞具有增进其激活和增生的作用。！！！

［要害词］ 烧伤 湿性医疗手艺 表皮干细胞 细胞免疫化学

烧伤湿性医疗手艺是烧伤治疗学上的具有立异性的治疗学术系统。！！！Ｏ衷谝牙殖刹⑵占巴乒愕闹瘟剖忠瘴丈耸筇宦读品ㄓ胧笊丈烁唷！！！Ｔ诹俅采侠殖傻亟饩隽松丈舜疵娴奶弁、创面熏染、创面的举行性坏死、烧伤深Ⅱ度创面的：：：塾系人拇蠊噬丈四烟狻！！！Ｗ罱秩〉昧嗽冖蠖壬丈舜疵嬷咀橹显偕し舻男Ч！！！Ｉ睥蚨壬丈撕颓尝蠖壬丈耸顾鹕说钠し舨辉俅媪舯砥せ撞愕母上赴！！！Ｒ虼，使脂肪层烧伤创面自然修复的表皮再生干细胞的泉源确实是值得深入研究的。！！！

材 料 与 方 法

1. 取材 以下2例患者受伤后连忙接纳烧伤湿性医疗手艺治疗。！！！

第1例：：：6岁男孩，热水烫伤，背部、双下肢。！！！Ｌ躺嗣婊33%。！！！Ｉ睥蚨忍躺恕！！！

第2例：：：24岁男性青年，火焰烧伤四肢。！！！Ｉ丈嗣婊25%，深Ⅱ度、浅Ⅲ度烧伤。！！！

以上2例于正常部位及伤后24h、4天、7天、14天、21天、28天患处取皮肤或组织，连忙放入冻存管于液氮中生涯。！！！Ｈ缓蠓湃隣CT冷冻剂复合物(Tissue-Tek OCT Compound)中包埋，于液氮中冷冻。！！！：：：憷湎浔城衅，厚度10祄。！！！

2. 生物素—抗生物素卵白DCS系统间接免疫荧光染色 先将冰冻切片用10%的马血清于4℃孵育20min，然后滴加1:20稀释的小鼠抗人角卵白19型单克隆抗体（第1抗体）4℃孵育住宿。！！！Ｇ衅诹姿峄撼逡褐袖滔春蠹拥2抗体，即7.5礸/ml生物素化的马抗小鼠IgG抗体(Vector Laboratories Burlingame, CA, USA)，4℃孵育1h。！！！ｄ滔春，加10礸/ml荧光素-抗生物素卵白DCS(Vector Laboratories Burlingame, CA, USA)于4℃孵育1h。！！！＝衅滔辞褰嗪，用含10%PBS和1%对苯基二胺(P-phenylenediamine)的甘油做介质封片。！！！１日杖旧衅，则不加第1抗体。！！！１瓯驹贠lympus反射式荧鲜明微镜下视察，并用ASA400 KODAK胶卷照相。！！！

结 果

用特异的小鼠抗人角卵白19型的单克隆抗体(McAb)对正：：：蜕丈似し裘庖呦赴硬煨Ч，两例正常皮肤表皮再生干细胞数目较少，可见少量显示荧光的表皮细胞再生干细胞（图5-4-1），即角卵白19型阳性细胞。！！！Ｉ丈撕24h，荧鲜明微镜下，显示荧光的表皮再生干细胞数目中等程度（图5-4-2），烧伤后4天，在汗腺、毛细血管和毛囊周围可见最先增多的潜在表皮干细胞（图5-4-3）。！！！

烧伤后7天（图5-4-4）,烧伤后14天（图5-4-5），在该两时间点镜下可见比烧伤后4天继续增多的表皮再生干细胞。！！！Ｇ痹诘脑偕上赴春私锹寻19型细胞的数目抵达烧伤疗程中的峰值（数目最多）。！！！Ｖ辽丈撕21天（图5-4-6）和28天（图5-4-7）两时间点潜在再生干细胞数目又减至一定的水平。！！！Ｊ硬熘蟹⒚骰颊呔陨丈艘搅剖忠罩瘟坪，潜在再生干细胞的增生状态有一定的转变纪律。！！！Ｇ痹谠偕上赴赡苁潜砥ぴ偕母上赴娜，这些在荧鲜明微镜下显示荧光的细胞是深Ⅱ度和浅Ⅲ度烧伤后还保存的潜在的表皮再生干细胞。！！！Ｕ庑┫赴墒股丈耸砸搅剖忠罩瘟频纳睥蚨壬丈宋揆：：：塾，浅Ⅲ度烧伤皮肤再生。！！！

讨 论

国际上对细胞周期的深入研究批注，细胞周期与心理性再生、创伤修复有亲近的关系。！！！Ｓ行┫赴憔谜习贕0期或G1期，在一定条件下才泛起增生涯动。！！！Ｓ行┫赴沙中傩衅扑榛疃，破碎后的部分子细胞分化为执行一定功效的成熟细胞，部分子细胞则一直坚持连续增生能力，称干细胞。！！！Ｆし舯砥せ撞愀上赴梢恢本傩衅扑，新生的细胞向上方移动，在抵达棘层深部时可再破碎二或三次，然后失去细胞破碎能力。！！！

深Ⅱ度和浅Ⅲ度烧伤损伤了皮肤表皮和真皮深层，表皮基底层的干细胞所有受到破损。！！！ＪＳ嘤谄は伦橹拿、汗腺，以及毛细血管周围的间充质细胞都有可能提供表皮再生的干细胞。！！！Ｓ捎谡庑┰偕上赴芎铣商赜械南赴锹寻(19型)，以是可接纳免疫细胞化学要领识别这些细胞。！！！Ｈ松褪遣┕俜酵狙芯拷幽闪丝谷私锹寻19型单克隆抗体，应用生物素－抗生物素卵白DCS系统间接免疫荧光手艺，能够准确、特异地检测出深Ⅱ度和浅Ⅲ度烧伤后剩余于皮下组织的表皮再生干细胞。！！！＞缮丈耸砸搅剖忠罩瘟坪，于烧伤后7天至14天阶段，潜在的再生干细胞即显示人角卵白19型免疫组织化学标记物的细胞数目抵达峰值。！！！Ｕ庑┫允炯浣用庖哂獾南赴褪枪┲静闵丈舜疵孀匀恍薷吹谋砥ぴ偕上赴！！！Ｓ捎谏丈耸筇宦读品ㄓ胧笊丈烁嗟闹瘟谱饔，可能激活了休眠状态的潜在的表皮再生干细胞的增生。！！！Ｕ庥辛Φ匕芰松睥蚨然蚯尝蠖壬丈，经烧伤湿性医疗手艺治疗后，抵达烧伤创面自然修复、无：：：塾系牧菩А！！！８檬忠丈ǔ松丈嘶颊叩鸟：：：叟阃丈耐纯唷！！！

表皮再生干细胞在移动和举行细胞破碎后，爆发合成其他类型角卵白(9型和16型）的细胞，这些细胞仍有移动能力。！！！Ｈ缓，它们破碎增天生的细胞合成较硬的角卵白(1型和10型），这是成熟的表皮细胞所含的典范角卵白。！！！Ｓ纱颂逑至松丈耸砸搅剖忠斩员砥ぴ偕上赴哂性鼋浼せ詈驮錾淖饔谩！！！

研究批注细胞从静止期释放出来，首先被激活的周期卵白就是cyclin D，只有受到生长因子刺激后，它才表达。！！！Ｕ婧讼赴镌谙赴腉1期决议进入增生状态照旧退出周期。！！！1限期制点的主要调控者是cyclin D1/CDK4复合体。！！！Ｎ松钊胙芯可丈耸砸搅剖忠樟菩ё饔没，我们将进一步探索表皮再生干细胞细胞周期的基因调控。！！！

图5-4-1 正常皮肤、未见角卵白19型阳性细胞  ×200

图5-4-2 经MEBT/MEBO治疗烧伤后 24h，可见中等程度卵白19型阳性细胞   ×200

图5-4-3经MEBT/MEBO治疗烧伤后4天，角卵白19型阳性细胞增多  ×200

图5-4-4 经MEBT/MEBO治疗，烧伤后7天，角卵白19型阳性细胞数目达峰值  ×200

图5-4-5 经MEBT/MEBO治疗，烧伤后14天，角质卵白19型阳性细胞数目达峰值  ×200

图5-4-6 经MEBT/MEBO治疗，烧伤后21天，角卵白19型阳性细胞镌汰  ×200

图5-4-7 经MEBT/MEBO治疗，烧伤后28天，角卵白19型阳性细胞镌汰  ×200

图5-4-1图5-4-7均为应用小鼠抗人角卵白19型单克隆抗体于冰冻切片染色(生物素－抗生物素卵白DSC系统间接免疫荧光)照片。！！！

(徐荣祥， 许增禄)